液相色谱柱的使用及注意事项

液相色谱柱的使用：

液相色谱柱在使用前，进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、液相色谱柱、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照液相色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是*条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

液相色谱柱样品的前处理：

1使用液相色谱柱溶解样品。

2使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。4.2.1.3使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。

3.液相色谱柱的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与液相色谱柱之间质量交换而达到分离的目的，因此要求液相色谱柱具备以下的特点：

4.液相色谱柱对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。4.2.2.2液相色谱柱具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

5.液相色谱柱的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低液相色谱柱的黏度)。

6.液相色谱柱的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，使用对紫外吸收较低的溶剂配制。

7.液相色谱柱沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

在液相色谱柱配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在液相色谱柱中的微量气体既有利于检测，还可以防止液相色谱柱中的微量氧与样品发生作用。

8.液相色谱柱流速的选择：因柱效是柱中液相色谱柱线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的液相色谱柱，要追求*柱效，使用*流速。对内径为4.6mm的液相色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。当选用*流速时，分析时间可能延长。可采用改变液相色谱柱的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

液相色谱柱使用注意事项：

a．由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。

b．对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作液相色谱柱，没有提纯的己烷不得使用。用水使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。

c．含水液相色谱柱在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为液相色谱柱不要过夜。加入叠氮化钠，防止细菌生长。

d．液相色谱柱要求使用0.45μm滤膜过滤，除去微粒杂质。

e．使用HPLC级溶剂配制液相色谱柱，使用合适的液相色谱柱可延长液相色谱柱的使用寿命，提高柱性能

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